Tiêu chuẩn TCVN 13292:2021 về Xác định hàm lượng curcurminoid bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao sử dụng detector UV-Vis

Ổn định cột bằng pha động A.

CHÚ THÍCH: Các thông số về tỷ lệ pha động, thể tích mẫu bơm, tốc độ dòng, nhiệt độ buồng cột có thể được điều chỉnh tùy thuộc vào điều kiện thực tế của thiết bị HPLC được sử dụng.

6.2.2  Dựng đường chuẩn

Để thiết bị ổn định tốc độ dòng và áp suất sau đó tiến hành bơm lần lượt các dung dịch chuẩn hỗn hợp đã chuẩn bị sẵn (3.8.2) vào hệ thống HPLC.

Xác định diện tích hoặc chiều cao pic của từng chất phân tích CUR, DMC và BDMC trong bộ dung dịch chuẩn hiệu chuẩn và các chuẩn được thêm vào. Đảm bảo rằng các diện tích pic chuẩn hiệu chuẩn được thêm vào nằm trong phạm vi sai lệch 5 % so với diện tích píc chuẩn hiệu chuẩn ban đầu.

Dựng đồ thị nồng độ chất phân tích (trục x) CUR, DMC và BDMC so với diện tích pic riêng lẻ (trục y). Sử dụng phân tích bình phương tối thiểu để xác định độ dốc, giao điểm và hệ số tương quan (R2) của đường phù hợp nhất đối với mỗi chất phân tích.

6.2.3  Phân tích mẫu thử

Bơm mẫu thử với cùng điều kiện như bơm chuẩn, xác định diện tích hoặc chiều cao pic. Dựa vào đường chuẩn của từng chất phân tích, xác định hàm lượng CUR, DMC và BDMC có trong mẫu thử.

Nếu diện tích pic hoặc chiều cao pic của mẫu lớn hơn diện tích pic hoặc chiều cao pic của chuẩn cao nhất thì phải tiến hành pha loãng mẫu trong metanol (3.1 và bơm lại. Cứ sau mười lần bơm mẫu lại bơm các dung dịch hiệu chuẩn hỗn hợp vì mục đích kiểm soát chất lượng.

...

...

...

7  Tính kết quả

Tính hàm lượng của mỗi curcuminoid (CUR, DMC, BDMC) có trong mẫu thử, X, biểu thị bằng miligam trên gam (mg/g) theo Công thức (1):

(1)

Trong đó:

C  là nồng độ của mỗi chất phân tích từ đường chuẩn, tính bằng miligam trên lít (mg/L);

V  là thể tích chiết, tính bằng lít (ở đây V = 0,025 lít);

k  là hệ số pha loãng;

m  là khối lượng của phần mẫu thử, tính bằng gam (g).

...

...

...

(2)

Trong đó:

  là giá trị trung bình của kết quả phân tích ba lần lặp lại, biểu thị bằng miligam trên gam (mg/g);

t_a,v  là giá trị của chuẩn t (ở đây giá trị t là 4,303 với ba lần lặp lại và a = 0,05);

 là sai số chuẩn, được tính theo Công thức (3):

(3)

Trong đó:

...

...

...

n  là số lần lặp lại (ở đây n = 3).

8  Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm ít nhất các thòng tin sau đây:

a) mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

b) phương pháp lấy mẫu, nếu biết;

c) phương pháp thử, viện dẫn tiêu chuẩn này;

d) mọi điều kiện thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này hoặc được xem là tùy chọn, cùng với mọi tình huống bất thường có thể ảnh hưởng đến kết quả;

e) kết quả thử nghiệm thu được.

...

...

...

(Tham khảo)

Sắc ký đồ điển hình của hỗn hợp dung dịch chuẩn và mẫu củ nghệ vàng

Hình A.1 - Sắc ký đồ phân tích của hỗn hợp dung dịch chuẩn

Hình A.2 - Sắc ký đồ phân tích của mẫu củ nghệ vàng